rtpcr的原理及步骤
rtpcr操作步骤 -
rtpcr操作有5个步骤。具体操作如下:1、总RNA提取。DEPC处理水溶解RNA,20℃保存,备反转录之用。2、反转录。按下列组成调制反应液:样品总RNA 1μg;随机引物或oligo-dT(18-20) 100pmol;脱氧核苷三磷酸(每种dNTP各l0mmol/L) 1μl;反转录缓冲液(5×) 4μl;RNase抑制剂(20~40U还有呢?
3、RT-PCR反应将上述加好模板的反应管混匀,短暂离心后放入PCR仪进行RT-PCR扩增,反应程序如下: 温度(C) 时间循环数60℃ 1min 1 42℃ 10min 50℃ 30min 95℃ 15min 94℃ 30s 35 52℃ 30s 72℃ 1min 72℃ 7min 1 4℃ 保存4、RT-PCR产物检测1)2.0%琼脂糖凝胶制备:称取2.0g Agarose,倒入耐热是什么。
rtpcr操作有5个步骤。具体操作如下:1、总RNA提取。DEPC处理水溶解RNA,20℃保存,备反转录之用。2、反转录。按下列组成调制反应液:样品总RNA 1μg;随机引物或oligo-dT(18-20) 100pmol;脱氧核苷三磷酸(每种dNTP各l0mmol/L) 1μl;反转录缓冲液(5×) 4μl;RNase抑制剂(20~40U还有呢?
3、RT-PCR反应将上述加好模板的反应管混匀,短暂离心后放入PCR仪进行RT-PCR扩增,反应程序如下: 温度(C) 时间循环数60℃ 1min 1 42℃ 10min 50℃ 30min 95℃ 15min 94℃ 30s 35 52℃ 30s 72℃ 1min 72℃ 7min 1 4℃ 保存4、RT-PCR产物检测1)2.0%琼脂糖凝胶制备:称取2.0g Agarose,倒入耐热是什么。