rtpcr的原理及步骤

rtpcr操作步骤 -
rtpcr操作有5个步骤。具体操作如下：1、总RNA提取。DEPC处理水溶解RNA，20℃保存，备反转录之用。2、反转录。按下列组成调制反应液：样品总RNA 1μg；随机引物或oligo­-dT(18-20) 100pmol；脱氧核苷三磷酸(每种dNTP各l0mmol／L) 1μl；反转录缓冲液(5×) 4μl；RNase抑制剂(20~40U还有呢？
3、RT-PCR反应将上述加好模板的反应管混匀，短暂离心后放入PCR仪进行RT-PCR扩增，反应程序如下： 温度(C) 时间循环数60℃ 1min 1 42℃ 10min 50℃ 30min 95℃ 15min 94℃ 30s 35 52℃ 30s 72℃ 1min 72℃ 7min 1 4℃ 保存4、RT-PCR产物检测1)2.0%琼脂糖凝胶制备：称取2.0g Agarose,倒入耐热是什么。